聯(lián)系電話：
18502669006
服務(wù)熱線： 15502280048
服務(wù)熱線： 
ELISA實驗出現(xiàn)“花板"現(xiàn)象大探秘 !
酶聯(lián)免疫吸附試驗 ELISA(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay)其原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記
1、花板原因大多在樣品
所謂“花板"
1.1
、 待測血清中混有紅細(xì)胞或纖維蛋白原 這兩種物質(zhì)易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，實驗表明在較高的離心轉(zhuǎn)速(3000 /min)和較長的離心時間(>10 min)之下，血液標(biāo)本被充分地離心分離之后，使紅細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀，可以在加樣時避免加入紅細(xì)胞和纖維蛋白，避免這兩種干擾物質(zhì)對實驗結(jié)果的影響，就可避免“花板"情況。
1.2
、 高IgG血癥 在實際工作中，檢測丙肝的實驗出現(xiàn)花板的情況較多，原因之一是因為目國內(nèi)外的抗-HCV EIA試劑均采用間接酶聯(lián)免疫檢測原理，間接法的一個重要影響因素是血清中所含的高濃度的非特異性IgG，IgG對聚苯乙烯有較強(qiáng)的吸附力，非特異性IgG可吸附到固相載體上或包被的抗原上造成假陽性。2
、解決辦法主要在洗滌聚苯乙烯因其具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能而被廣泛用于ELISA實驗的固相載體
，聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，因此需要通過洗滌清除在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。洗滌在 ELISA 過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻決定著實驗的成敗。上述提到的血清中存在紅細(xì)胞或纖維蛋白原，可以在加樣離心時得到控制，同樣也可以通過適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和浸泡時間減輕或避免對實驗結(jié)果的影響，同樣，對于血液存在的非特異性的IgG,實驗者很難在加樣時將其去除，那么解決的時機(jī)就是洗滌過程。ELISA在洗滌過程中需注意以下幾點：
(1)
、板要平整，尤其是在用洗板機(jī)洗板的過程中，往往是3排一起洗，如果板不平(2)、洗液溫度
，實驗表明，洗液溫度也會影響洗板的干凈程度，尤其是冬天溫度過低時容易出現(xiàn)“花板"問題。因此，保持室溫在20℃-30℃。(3)
、洗液要注滿孔，孔壁洗滌不干凈也易造成“花板"現(xiàn)象。(4)
、洗液要新鮮配置，洗液要臨用新鮮配制，放置時間過長易產(chǎn)生絮狀物或混濁，造成賭孔或花板。(5)
、洗板次數(shù)不夠或洗滌間隔時間過短也會造成由于洗板不凈而造成“花板"。3
、孵育時間過長也會造成“花板"實驗室有一段時間經(jīng)常出現(xiàn)丙肝檢測“花板"現(xiàn)象
，究其原因是由于樣本較多，加樣后未及時放入孵育箱，反應(yīng)板在室溫呆的時間過長，即間接增加了孵育時間，導(dǎo)致孵育時間過長，蛋白質(zhì)非特異性吸附于固相載體。因此，應(yīng)嚴(yán)格控制加樣時間，加樣后及時孵育，標(biāo)本較多時可分批操作。此外
，有些廠家的試劑顯色液不穩(wěn)定，使用容易變藍(lán)，如在實驗不仔細(xì)檢查，很容易導(dǎo)致“花板"現(xiàn)象的發(fā)生，這也提醒實驗者應(yīng)使用新鮮的顯色液，程度的實驗的準(zhǔn)確性綜上所述，將ELISA“花板"現(xiàn)象總結(jié)為：花板原因大多在樣品
ELISA本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
