聯(lián)系電話：
18502669006
服務(wù)熱線： 15502280048
服務(wù)熱線： 
您現(xiàn)在的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 免疫組化技術(shù)與Western blotting
、ELISA的異同免疫組化技術(shù)與Western blotting
1)Western blotting
蛋白質(zhì)免疫印跡，也是利用抗體抗原反應(yīng)原理
2)ELISA
酶聯(lián)免疫吸附試驗
(一)雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測抗原常用的方法
，操作步驟如下：(1)將特異性抗體與固相載體連接
，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。(2)加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間
，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。(3)加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合
。洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。(4)加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物
。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。根據(jù)同樣原理
，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物，即可用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中的抗體。(二)雙位點一步法
在雙抗體夾心法測定抗原時
，如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測定時可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步(圖15-5)。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。在一步法測定中
，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)(hookeffect)，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測抗原濃度相當(dāng)高時(三)間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的方法
(1)將特異性抗原與固相載體連接
，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物
。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。(3)加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶
。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。(4)加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。
本法只要更換不同的固相抗原
，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。(四)競爭法
競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體
。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：(1)將特異抗體與固相載體連接
，形成固相抗體。洗滌。(2)待測管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)
。如受檢標(biāo)本中無抗原，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則與酶標(biāo)抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合，競爭性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機會，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原(五)捕獲法測IgM抗體
血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在
(1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上
(2)加入稀釋的血清標(biāo)本：保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲
。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。(3)加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌
。(4)加入針對特異性的酶標(biāo)抗體：使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合
。洗滌。(5)加底物顯色：如有顏色顯示
，則表示血清標(biāo)本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應(yīng)。(六)應(yīng)用親和素和生物素的ELISA
親和素是一種糖蛋白
，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結(jié)合?div id="d48novz" class="flower left">親和素-生物素系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用有多種形式
ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升
技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
