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實驗原理：瓊脂糖凝膠電泳實驗方法及原理
實驗方法原理
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法
。其分析原理與其他支持物電泳的主要區(qū)別是：它兼有“分子篩"和“電泳"的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)
蛋白質(zhì)和核酸會根據(jù)pH不同帶有不同電荷
DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷
實驗材料 DNA
試劑、試劑盒 瓊脂糖TBE電泳緩沖液電泳載樣緩沖液/溴/化乙錠(EB)溶液母液DNAGreen
儀器
實驗步驟
一
、試劑配制1. 5×TBE緩沖液：450 mmol/L Tris-硼/酸，10 mmol/L EDTA，pH值8.0
二
1. 根椐制膠量及凝膠濃度
容量)
瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的分辨范圍
2. 在錐瓶的瓶口上蓋上保鮮膜或牛皮紙
3. 使溶液冷卻至50℃-60℃左右
4. 將瓊脂糖溶液倒入制膠模中
5. 在室溫下使膠凝固
三、上樣
1. 取適量樣品與6×上樣緩沖液混勻(如：1 μl樣品與5 μl 6×上樣緩沖液)
，用微量移液槍小心加入樣品槽中。2. 上樣量根據(jù)樣品濃度可適當(dāng)調(diào)整，若DNA含量偏低
，則可依上述比例增加上樣量，但總體積不可超過樣品槽容量(一般小孔40 μl 為上限，大孔200 μl 為上限，具體和制膠膜規(guī)格相關(guān))。3. 每加完一個樣品要更換槍頭
，以防止互相污染，注意上樣時要小心操作，避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。四、電泳
1. 加完樣后
，合上電泳槽蓋，立即接通電源?div id="4qifd00" class="flower right">2. 當(dāng)條帶移動到距凝膠前沿約2 cm時(約40 min)
，停止電泳。3. 紫外下拍照并觀察。
注意事項
1. 5×TBE緩沖液放置時間過久會沉淀
2. 用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須統(tǒng)一
3. 瓊脂糖粉在微波爐中加熱時間不宜過長
4. 凝膠不立即使用時
，請用保鮮膜將凝膠包好后在4℃下保存，一般可保存2～5天。瓊脂糖凝膠電泳本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命
，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
