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本生快訊——ELISA檢測(cè)需做好那幾點(diǎn)
，可得出正確結(jié)果
更新時(shí)間：2023-10-07瀏覽：1023次

　　本生快訊——ELISA檢測(cè)需做好那幾點(diǎn)

，可得出正確結(jié)果
 

　　ELISA檢測(cè)系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中最為廣泛最為靈敏的技術(shù)手段

?div id="jfovm50" class="index-wrap">？墒窃谛吕鲜植僮鬟^(guò)程中總是會(huì)出現(xiàn)或大或小的問(wèn)題
，比如說(shuō)花板
，假陽(yáng)性
，全顯色
，全部顯色
，顯色比空白還低.....
。天津本生技術(shù)小編為您總結(jié)7步ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，做好這7步您就能得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
。

　　1

、包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度
，是否降解
，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別，所以保存抗原很重要
，我做重組蛋白時(shí)
，老師嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。還有有的包被原可能不是蛋白
，對(duì)于生物素和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被
，方法簡(jiǎn)要的列出如下:

　　①親和素生物素:先親和素先包被載體

，加入生物素化的DNA
，這種包被方法均勻、牢固
，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定
。

　　②脂類(lèi)物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中

，開(kāi)蓋置冰箱過(guò)夜或冷風(fēng)吹干
，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面
。

　?div id="m50uktp" class="box-center"> 、坌》肿颖仨氁揽亢痛蟮牡鞍纵d體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

　　2

、包被液的選擇
，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要
，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包
。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙xi固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用
，這種物理吸附是非特異性的
，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)
、濃度等的影響
，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面
。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐
，看一下最終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去
。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等
。

　　3

、封閉：繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙
，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附
。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價(jià)廉
，可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等
。但最終選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)具體來(lái)實(shí)踐
。

　　4

、洗滌板：可以說(shuō)在ELISA操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)
。因?yàn)榫郾揭襵等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的
，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)
，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)
，在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。所以在洗板時(shí)會(huì)有一定誤差
，人為因素很大(當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外)
，洗的不或串了孔，對(duì)如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響
。

　　5

、加抗體標(biāo)本(和二抗):注意該換槍頭時(shí)換槍頭。標(biāo)本稀釋一般可用PBS稀釋?zhuān)部捎梅忾]液去稀釋
。如需加二抗
，還要注意二抗的工作濃度
，太高浪費(fèi)
，太低則著色淺。

　　6

、顯色：顯色系統(tǒng)又很多
，我們一開(kāi)始做的時(shí)候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)
。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵
，AP結(jié)合物可加疊氮鈉。

　　7

、每次做盡量要把陰陽(yáng)空三個(gè)對(duì)照做好
，如出現(xiàn)問(wèn)題也好分析
。

　　ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升

。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法
，嚴(yán)于律己，寬仁以待
，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)
，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求
。與客戶(hù)的共贏
，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴
。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作
，共創(chuàng)美好的未來(lái)。


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