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　　PCR方法:

　　PCR的原理在這里不需要進(jìn)一步解釋。多年來

，研究人員基于此開發(fā)了一系列衍生技術(shù)。當(dāng)前的PCR方法可分為三類：終點PCR，qPCR和dPCR。

　　終點PCR:

　　端點PCR是原始

，簡單的PCR方法，并且今天仍然被廣泛使用。 PCR反應(yīng)完成后，用戶只能通過凝膠電泳，毛細(xì)管電泳等方法檢測產(chǎn)物。終點PCR本身無法量化，因為反應(yīng)產(chǎn)生的DNA數(shù)量可能無法反映初始情況。例如，不同樣品和序列之間的擴增效率存在差異。

　　qPCR和dPCR:

　　研究人員已經(jīng)通過兩種方式克服了定量PCR分析的挑戰(zhàn)：實時定量PCR(qPCR)和數(shù)字PCR(dPCR)。 qPCR主要使用插入染料或熒光探針(例如TaqMan)

。通過監(jiān)測PCR期間的熒光強度，可以比較多個樣品的DNA水平。數(shù)字PCR(dPCR)的基本工作原理很簡單。先將樣品分為多個PCR反應(yīng)，每個反應(yīng)多包含一個模板。然后通過對陽性和陰性反應(yīng)進(jìn)行計數(shù)來確定初始樣品中模板分子的數(shù)量。

　　盡管qPCR和dPCR都能夠定量樣品中的核酸

，但它們有一個重要的區(qū)別。 qPCR只能實現(xiàn)相對定量(例如，樣品A的目標(biāo)序列是樣品B的目標(biāo)序列的兩倍)，除非使用此標(biāo)準(zhǔn)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。數(shù)字PCR本身是絕對定量的，不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。另一方面，qPCR技術(shù)更加成熟，市場上有大量商業(yè)產(chǎn)品可供選擇。 dPCR仍然是小的新鮮肉。它不如qPCR廣泛使用且價格昂貴。與dPCR相比，qPCR更適合于高通量分析，并且動態(tài)范圍廣